正确答案: ABDEF

每条引物长度通常为18～25个核苷酸 引物3'端的第1、2个碱基必须与模板严格配对 引物5'端可加修饰成分，如酶切位点、引入突变位点、生物素标记等 两引物有匹配的GC含量和相似的退火温度 引物序列通常位于基因组DNA的高度保守区

题目： PCR引物设计是实验成败的关键环节。

解析：引物设计的原则包括：①引物长度以18～25bp为宜，引物过长，模板结合不充分，导致扩增产物减少；引物过短(＜15bp)，导致非特异性扩增，降低产物的特异性。②引物序列通常位于基因组DNA的高度保守区。一对引物间不应存在互补序列，避免形成引物二聚体。③两引物有匹配的GC含量和相似的退火温度，否则会影响扩增的效率和特异性。通常G+C含量为45%～55%。④引物3'端的第1、2个碱基影响Taq DNA聚合酶的延伸效率，影响PCR的扩增效率和特异性，必须与模板严格配对；引物5'端可加修饰成分，如酶切位点、引入突变位点、启动子序列、生物素、荧光素和地高辛标记等，以便对产物进行分析和克隆等。

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